ELISA實(shí)驗(yàn)做不好？天津阿斯?fàn)朏AQ來(lái)幫你

特點(diǎn)： 在直接ELISA中，被測(cè)抗原被固定在多孔板表面，用一種針對(duì)該抗原的抗體檢測(cè)，該抗體直接與HRP或其他檢測(cè)分子結(jié)合。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單快速，避免交叉反應(yīng)。

缺點(diǎn)：潛在高背景，沒(méi)有信號(hào)放大。

特點(diǎn)：固相載體包被抗原，酶標(biāo)記二抗，主要用于測(cè)抗體。

優(yōu)點(diǎn)：使用酶標(biāo)二抗增加了靈敏度，靈活大，成本低。

缺點(diǎn)：交叉反應(yīng)幾率升高。

用途：通過(guò)檢測(cè)血清中的抗體來(lái)檢測(cè)病毒，如第1，2代艾滋病診斷試劑。最常用免疫動(dòng)物血清中抗體含量的測(cè)定。

雙抗體夾心ELISA法

特點(diǎn)：使用兩個(gè)特異性單抗或者1個(gè)特異性單抗和1個(gè)特異性多抗，固相載體包被抗體，酶標(biāo)記特異性抗體作為檢測(cè)抗體。

優(yōu)點(diǎn)：使用兩個(gè)特異性抗體檢測(cè)，特異性好。

缺點(diǎn)：成本高。

用途：用于抗原的定量檢測(cè)。

特點(diǎn)：包被抗體，標(biāo)記抗原，樣本中的抗原與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，標(biāo)本中抗原含量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原越少，最后的顯色也越淺。

注意：該原理強(qiáng)調(diào)抗原與抗體的充分結(jié)合，因此溫度、搖床（振速、振幅）、反應(yīng)時(shí)間等因素值得注意！

用途：小分子抗原或者半抗原的定量檢測(cè)，當(dāng)抗原材料中干擾物質(zhì)不易去除或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，多用于此方法檢測(cè)；一般小分子激素及藥物常用此法測(cè)定。

* RSR旗下AChR Ab-ELISA、TRAb 2nd-ELISA、TRAb 3rd-ELISA等都是基于競(jìng)爭(zhēng)法ELISA的原理基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的試劑盒，是該項(xiàng)目全球首創(chuàng)ELISA定量檢測(cè)方法，特異性均達(dá)到99%以上。

A: ELISA實(shí)驗(yàn)終止后形成的是黃色物質(zhì)，該物質(zhì)需要在450nm處測(cè)定其吸光度，當(dāng)OD450值≥3時(shí)，應(yīng)使用OD405的值進(jìn)行轉(zhuǎn)換（乘轉(zhuǎn)換系數(shù)3.4，參見(jiàn)說(shuō)明書）。

RSR試劑盒中設(shè)計(jì)的空白孔屬于試劑空白，建議按照“空白孔+兩次單波長(zhǎng)檢測(cè)（405nm & 450nm）”完成實(shí)驗(yàn)，無(wú)需再設(shè)置參考波長(zhǎng)（630nm）。

A: CV值是統(tǒng)計(jì)學(xué)中的一個(gè)概念，中文是變異系數(shù)，可以認(rèn)為變異系數(shù)和極差、標(biāo)準(zhǔn)差和方差一樣，都是反映數(shù)據(jù)離散程度的絕對(duì)值。CV值越小，說(shuō)明數(shù)據(jù)的波動(dòng)程度越小。在描述板內(nèi)、板間實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否一致時(shí)常用到CV值，其越小，說(shuō)明批內(nèi)及批間差越小，試劑盒質(zhì)量越好。

A:

ELISA數(shù)據(jù)處理中所謂的“標(biāo)準(zhǔn)曲線”其實(shí)更適合稱為擬合曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)根據(jù)不同待測(cè)物質(zhì)的特性和檢測(cè)范圍選擇適當(dāng)?shù)臄M合方式。除常見(jiàn)的直線、多項(xiàng)式曲線、指數(shù)曲線、對(duì)數(shù)曲線等外，四參數(shù)Logistic回歸和三次樣條插值cubic spline擬合對(duì)定量范圍內(nèi)全域具有更良好的適用性，能夠比較精確的反映濃度和吸光度間的轉(zhuǎn)換關(guān)系，從而進(jìn)一步準(zhǔn)確獲得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。

在RSR試劑盒中，擬合方式可根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書自行選擇4 parameters（四參數(shù)Logistic曲線）或cubic spline（三次樣條/仿樣曲線/樣條曲線等），通過(guò)酶標(biāo)儀搭配的計(jì)算軟件完成數(shù)據(jù)的處理，從而快速、準(zhǔn)確地完成定量檢測(cè)。

A: 通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類型的，在使用前應(yīng)留意試劑盒匹配的樣本類型，包括血清、血漿、腦脊液等常規(guī)樣品，以及尿液、細(xì)組織勻漿液、細(xì)胞裂解液等樣品。對(duì)于超出試劑盒適用樣本類型的樣本，市面上很多廠家的產(chǎn)品都沒(méi)有相關(guān)的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，客戶如有需要可以自行測(cè)試。需要注意的是，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。樣品中含有影響生物活性的物質(zhì)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

A: ELISA試劑盒對(duì)于溫度的要求比較嚴(yán)格，溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素，這樣做主要是為了使試劑溫度一致，在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地滿足測(cè)定要求。

A: 樣本收集后應(yīng)盡快檢測(cè)。如果樣本收集后不能立即檢測(cè)時(shí)：一周內(nèi)可檢測(cè)則需將樣本置于4℃環(huán)境下，冷藏保存。3年內(nèi)檢測(cè)則需將樣本至于-20℃或更低溫度環(huán)境下保存。

A:樣品反復(fù)凍融對(duì)蛋白影響非常大，能導(dǎo)致蛋白降解，非常不建議反復(fù)凍融樣品。一般蛋白含量豐富的樣本例如血清/血漿反復(fù)凍融1-2次，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響不是非常大。

A: 復(fù)溶的生物素化制劑和酶結(jié)合物建議依據(jù)使用說(shuō)明書內(nèi)的有效期和儲(chǔ)存條件使用，放置時(shí)間太長(zhǎng)可能會(huì)影響其活性。可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)所需用量進(jìn)行配制，不建議過(guò)量配制。