第三代促甲狀腺激素受體抗體檢測(cè)產(chǎn)品的性能評(píng)估：Smith博士首創(chuàng)基于M22-生物素的酶聯(lián)免疫法

圖1展示了基于M22的測(cè)定（表述為第三代TRAb，以TRAb_3rd表示）和基于抑制TSH-生物素的測(cè)定（表述為第二代TRAb測(cè)定，以TRAb_2nd表示）的檢測(cè)原理。

圖1 二代和三代TRAb檢測(cè)原理。二代TRAb利用待測(cè)TRAb與TSH-生物素形成競(jìng)爭(zhēng)抑制，抑制其與固相TSHR結(jié)合；三代TRAb利用待測(cè)TRAb與M22-生物素形成競(jìng)爭(zhēng)抑制，抑制其與固相TSHR結(jié)合。

研究分析了230名健康對(duì)照者的血清抗體，只有1名（0.43%）對(duì)M22結(jié)合值的抑制率大于臨界值15%（32.8%）。

從244例未經(jīng)治療的GD患者中計(jì)算靈敏度（真陽性結(jié)果），并從三個(gè)對(duì)照組中計(jì)算特異性（真陰性結(jié)果）。二代TRAb檢測(cè)特異性100%，靈敏度99.2%時(shí)，抑制率臨界值為22%。

為了確認(rèn)三代TRAb產(chǎn)品的臨床臨界值，我們對(duì)244例未經(jīng)治療的GD患者（疾病組）和三個(gè)不同對(duì)照組（下表）進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了ROC曲線分析。

圖2 三代TRAb不同對(duì)照組間ROC曲線。a:疾病組+對(duì)照組1；b：疾病組+對(duì)照組2；c:疾病組+對(duì)照組3。

根據(jù)結(jié)果建議三代TRAb抑制率臨界值為15%。

在15%的臨界值下，第三代TRAb對(duì)于新診斷GD、PT和SAT患者的血清樣本靈敏度和準(zhǔn)確性與第二代相比如表1所示，數(shù)值分布如圖3所示。

圖3 二代與三代TRAb在不同患者組間檢測(cè)數(shù)值分布圖

注：a組為三代TRAb分別在GD、PT以及SAT三組間檢測(cè)值分布；b組為二代TRAb在三組間分布。

在244例未經(jīng)治療的Graves病患者中，三代檢測(cè)與二代檢測(cè)結(jié)果高度相關(guān)（r=0.911），但三代檢測(cè)（243例，99.6%）的抗體陽性率高于二代檢測(cè)（242例，99.2%）。在對(duì)照組中，三代檢測(cè)在9.2%的PT組和6.7%的亞急性甲狀腺炎（SAT）組中檢出抗體；二代檢測(cè)在16.8%的PT組和13.3%的SAT組中檢出抗體。

表1 二代與三代TRAb在三個(gè)疾病組間陽性率的比較

圖4 二代與三代TRAb間結(jié)果相關(guān)性比較。橫軸為三代TRAb，縱軸為二代TRAb。

甲狀腺功能亢進(jìn)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)差異較大。在日本等碘攝入量高的國(guó)家及地區(qū)，大多數(shù)甲狀腺毒癥病例是由GD和PT引起的，而在碘攝入量低的地區(qū)，GD和毒性多結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是甲狀腺功能亢進(jìn)的常見原因[4]。在目前的臨床實(shí)踐中，需要在甲狀腺毒癥患者中檢測(cè)TRAb以鑒別GD患者。在本研究中，我們證實(shí)了基于M22-生物素競(jìng)爭(zhēng)抑制的ELISA方法（三代TRAb）在診斷GD以及鑒別GD和PT引起的甲狀腺毒癥患者方面的高靈敏度。

我們的結(jié)果最終表明，在患有GD和PT的甲亢患者中，基于M22第三代TRAb檢測(cè)的準(zhǔn)確性為96.7%，顯著優(yōu)于第二代TRAb準(zhǔn)確性為93.9%（p=0.0026）。尤其是在GD和PT患者的鑒別診斷上，三代檢測(cè)性能顯著優(yōu)于二代。新方法的在預(yù)測(cè)停藥后GD的預(yù)后情況，以及自身抗體與Graves眼病的關(guān)系上的臨床價(jià)值有待進(jìn)一步發(fā)掘。

參考文獻(xiàn)：Kamijo K ,   Ishikawa K ,   Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.