間接免疫熒光法（基于BIOCHIP嵌合技術(shù)）與ELISA法診斷重癥肌無力的比較分析發(fā)表時間：2023-04-17 12:51作者：RSRTJ 編者按 我國重癥肌無力指南推薦AChR抗體和MuSK抗體的檢測方法為放射免疫法（RIA）和酶聯(lián)免疫法（ELISA），兩者均可提供精準的定量結(jié)果。近期市場上新推出了一些基于間接免疫熒光法（IIF）的檢測技術(shù)和產(chǎn)品，與指南推薦的ELISA方法比較結(jié)果如何呢？ 現(xiàn)分享一篇發(fā)表在Diagnostics雜志的文章，該研究表明：無論是AChR抗體還是MuSk抗體，免疫熒光方法作為一種新的應用，與ELISA方法相比，尚無法滿足臨床對MG的診斷需求 重癥肌無力(MG)是一種慢性自身免疫性疾病，其特征是自身抗體介導的神經(jīng)肌肉傳遞障礙，導致骨骼肌無力和疲勞[1-3]。發(fā)病特點是眼部肌肉無力，導致復視和/或上瞼下垂。約20%的患者僅表現(xiàn)為眼肌癥狀，通常稱為眼肌型MG (OMG)，而大多數(shù)患者在幾年內(nèi)出現(xiàn)其他骨骼肌癥狀，進展為全身型MG (GMG)。發(fā)病特點為早發(fā)和晚發(fā)2個高峰，分別多見于40歲以下的女性和50歲左右的男性[4]。 自身抗體的檢測對于MG的診斷、預后和對治療反應監(jiān)測至關(guān)重要[5]。位于神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上的乙酰膽堿受體(AChR)自身抗體對MG具有高度特異性，該抗體具有致病性，在大約85%的MG患者中可檢測到[6]。在大約6%的MG患者中，自身免疫反應是靶向肌肉特異性酪氨酸激酶(MuSK)[7]。MuSK自身抗體也具有致病性，主要在年輕女性中檢測到，并與疾病進展的嚴重程度相關(guān)[8]。 目前，市場上檢測AChR和MuSK自身抗體的商業(yè)化方法，包括放射免疫沉淀法(RIPA)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[9-13]。最近，一種新的基于BIOCHIP嵌合技術(shù)的多參數(shù)間接免疫熒光(IIF)檢測方法可同時檢測抗AChR和MuSK自身抗體。本研究旨在比較BIOCHIP IIF法與常規(guī)ELISA檢測方法檢測AChR和MuSK自身抗體的性能。 材料與方法 1. 研究人群 本研究為觀察性回顧性研究，納入71例來自意大利巴勒莫大學附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的MG確診患者，其中男性40例（31 - 83歲），女性31例（18 - 78歲）。MG的診斷是基于MG的國際共識指南[14]。 在所有MG患者中，10例(14%)患有胸腺瘤，9例(13%)使用膽堿酯酶抑制劑單藥治療，大多數(shù)(55%)另外使用口服糖皮質(zhì)激素和/或用于激素減量的免疫抑制劑治療(29%)。 2.檢測方法 檢測AChR自身抗體：商品化ELISA定量試劑盒（RSR Ltd., 英國)和BIOCHIP IIF方法(MG mosaics, Euroimmun,德國) 檢測MuSK自身抗體：商品化ELISA定量試劑盒(IBL International GmbH, 德國)和BIOCHIP IIF方法(MG mosaics, Euroimmun, 德國)。 結(jié)果 1. AChR Ab檢測結(jié)果比較 71例MG患者中，AChR抗體經(jīng)ELISA法定量檢測陽性率為44/71(62%)，經(jīng)BIOCHIP IIF法定性檢測陽性率為27/71(38%)。 表1列出了ELISA法和IIF法檢測AChR抗體陽性的檢出情況。兩種方法檢測AChR抗體的總體一致性為(26 + 26)/70 = 74%，kappa系數(shù)為0.51 (95% CI 0.32-0.71)。 表1 BIOCHIP IIF與ELISA檢測抗AChR抗體的一致性  ELISA法檢測AChR自身抗體的中位數(shù)(IQR)水平為1.25(0.25-12.88) nmol/L，其中13名受試者的抗體水平高于20 nmol/L (圖1)。值得注意的是，17例ELISA法陽性的MG確診患者中，BIOCHIP IIF僅能識別出2例抗體濃度呈中高水平的樣本陽性（2/17，11.8%），其余15例低抗體水平的樣本均無法被BIOCHIP IIF法識別。  圖1 (a)AChR抗體直方圖。大于20的結(jié)果在這里表示為20；(b)MuSK抗體直方圖。 2. MuSK抗體檢測結(jié)果比較 71例MG患者中，MuSK抗體經(jīng)ELISA法定量檢測陽性率為11/71(15%)，經(jīng)BIOCHIP IIF法定性檢測陽性率為2/71(4%)。 表2列出了ELISA法和IIF法檢測MuSK抗體陽性的檢出情況。兩種方法對MuSK抗體檢測結(jié)果的總體一致性為(58 + 1)/70 = 84%。kappa系數(shù)為0.11 (95% CI 0.00-0.36)。 表2 BIOCHIP IIF法與ELISA法檢測抗MuSK抗體的一致性  討論 MG的診斷需要臨床特征和實驗室診斷的多因素共同結(jié)合(圖2)。AChR和MuSK自身抗體的靈敏和特異性檢測已成為評估MG患者的必要實驗室指標，因為血清陽性具有診斷、預后和治療意義[15-19]。  圖2 MG的診斷算法。血清學抗體檢測是診斷MG的金標準。 MuSK抗體陽性患者預后較差，患者主要表現(xiàn)為延髓和呼吸肌受累，呼吸危象頻發(fā)[3,20 - 22]。該類患者對膽堿酯酶抑制劑反應較差，常規(guī)的溴吡斯的明劑量經(jīng)常引起副作用，而它們對糖皮質(zhì)激素和許多類固醇保留劑的反應良好[23,24]。此外，對于初始免疫治療反應不理想的患者，應考慮將利妥昔單抗作為早期治療方案[25,26]。MuSK抗體主要屬于IgG4亞類，它不涉及補體激活，而是直接抑制蛋白質(zhì)功能[27,28]。MuSK抗體的濃度水平與癥狀嚴重程度和血漿置換反應的降低呈正相關(guān)[29]。 與MuSK抗體不同，AChR自身抗體主要屬于IgG1和IgG3亞類，具有活躍的補體級聯(lián)，導致突觸后膜的破壞[30,31]。患者AChR自身抗體水平的時間變化可能與癥狀嚴重程度和對治療的反應有關(guān)。因此，AChR和MuSK抗體分別與具有不同免疫病理機制的MG相關(guān)。 在過去的幾十年里，已經(jīng)開發(fā)了幾種檢測抗AChR和抗MuSK自身抗體的分析方法，如RIPA和ELISA[32-34]。本次評估的BIOCHIP IIF方法可同時檢測AChR和MuSK自身抗體，雖然不能提供定量的血清自身抗體水平，但同時對所有相關(guān)抗體進行多參數(shù)分析可提供更快的結(jié)果和更具成本效益的方法。 本研究首次比較了新的多參數(shù)BIOCHIP IIF技術(shù)與ELISA在AChR和MuSK自身抗體評價方面的性能。結(jié)果顯示，BIOCHIP IIF與ELISA法之間的整體一致性不佳。研究結(jié)果顯示，用于MG診斷的BIOCHIP IIF法不能準確識別特定的自身抗體。尤其在ELISA中測得的低滴度自身抗體無法在BIOCHIP IIF中識別，從而患者被確認為“血清陰性”。綜上所述，BIOCHIP需要進一步改進檢測性能以滿足臨床對MG的診斷需求。 參考文獻：Gambino C , Agnello L , Sasso B L , et al. Comparative Analysis of BIOCHIP Mosaic-Based Indirect Immunofluorescence with Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Diagnosing Myasthenia Gravis.[J]. Diagnostics (Basel, Switzerland), 2021, 11(11). |
